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Position: Home > Articles > Construction of Eukaryotic Vector Expressing Taenia solium dUTPase and Its Expression in BHK Cell Line Progress in Veterinary Medicine 2007,28 (6) 10-13

猪带绦虫dUTPase基因真核载体的构建及其在BHK细胞中的表达

作  者：
张艳;乔军;才学鹏;景志忠;骆学农;王笑笑
单  位：
甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室
关键词：
猪带绦虫;六钩蚴;dUTPase;重组质粒;转染
摘  要：
采用PCR技术从重组克隆载体pGEM-dUTPase中扩增出猪带绦虫六钩蚴dUTPase基因,与表达载体pGFP-C1相连接,构建重组表达质粒pGFP-C1-dUTPase,转化大肠埃希菌DH5α,经测序证实,基因序列完全正确。用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR技术确定目的蛋白的表达情况。结果表明,在转染重组质粒48 h后能观察到绿色荧光,表明在BHK细胞中成功地表达了猪带绦虫dUTPase与pGFP-C1的融合蛋白,为下一步重组dUTPase酶活性的研究奠定了基础。
译  名：
Construction of Eukaryotic Vector Expressing Taenia solium dUTPase and Its Expression in BHK Cell Line
作  者：
ZHANG Yan1,2,QIAO Jun2,CAI Xue-peng2,JING Zhi-zhong2,LUO Xue-nong2,WANG Xiao-xiao1,2 (1.College of Animal Medical Sciences,Gansu Agricultural University,Lanzhou,Gansu,730070,China;2.State Key Lab of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou,Gansu,730046,China)
关键词：
Taenia solium;oncosphere;dUTPase;recombination plasmid;transfection
摘  要：
Taenia solium oncosphere dUTPase gene has been amplificated from recombinant cloning vector pGEM-dUTPase by PCR,and expression plasmid pGFP-C1-dUTPase has been constructed by connecting with expression vector pGFP-C1,and then converted Bacillus coli.strain DH5α.Through sequencing,the gene sequence is correct completely.Using Lipofectin to transfect into the BHK cells,by fluorescence microscope to observe fluorescence,expression of the interest protein can be determined.Results:After transfecting 48 hours,the Green fluorescence can be observed under fluorescence microscope The results indicate that fusion protein of dUTPase and pGFP-C1 was successfully expressed in BHK cells.This method can be further used to establish foundation to study enzymatic activity.

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