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旱稻Tail-PCR技术主要影响因素的优化和验证

作  者:
朱昀;李朝炜;刘嗣凡;刘颖;魏景芳
关键词:
旱稻;Tail-PCR技术;优化;影响因素
摘  要:
以转基因旱稻为材料,对Tail-PCR方法进行了分析优化,包括DNA样品质量、扩增产物稀释程度、酶的种类、简并引物组合方式、引物结合偏好性等.结果表明,DNA样品质量的高低是影响试验成功的重要因素,样品纯度不高导致扩增无法正常进行;扩增后对产物稀释不充分会影响下轮扩增效果,适当增大产物稀释倍数可在下轮扩增中增大出带可能;LA Taq酶与普通Taq酶相比扩增效果没有明显不同,使用普通Taq酶即可进行Tail-PCR扩增;混合简并引物在旱稻中并没有获得更好的扩增效果.此外,发现简并引物对于不同物种存在偏好性,常规4种简并引物与旱稻基因组均可高效结合.优化后的Tail-PCR技术结果稳定,重复性好,可以准确地获得转基因旱稻插入位点的旁侧序列.

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