目录结构
中国畜禽种业 2018(12),90-91
犬发情期血清孕酮水平与最佳配种时间测定
江苏农牧科技职业学院;
- 摘 要：
- 通过在泰爱牧宠物医院对发情母犬血清孕酮检测,统计发情期法斗母犬血清孕酮水平,并探索出最佳配种时机,增加该犬种交配的成功率,增加繁殖率,帮助推算出分娩时间。结果表明,法斗血清孕酮值在25～45ng/ml时受孕率可达到75[%]]以上,此时为最佳的配种时机。文中主要对犬发情周期中阴道细胞学、血清孕酮进行简要论述和探讨。
关键词：犬发情;孕酮;阴道涂片;配种时期;
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犬的发情是指犬在达到性成熟后在一些激素的作用下出现 生理和行为的周期性变化 。 在繁殖学上讲 ， 犬是季节性单次发 情动物或者双次发情动物 [1] 正常情况 ， 母犬一般一年发情两 次 ， 母犬发情的标志是阴道流血 ， 阴道流血正常情况下会持续 21d 左右 [2] 。 每次发情间隔约 6 个月左右 ， 单养犬多数在春秋 两季发情 （3～5 月 ， 9～11 月 ）。 根据犬的不同性生理变化 ， 把 犬性周期分为 4 个阶段 ， 即乏情期 、 发情前期 、 发情期 、 发情 间期 [3] 。
法国斗牛犬发情期季节性较明显 ， 一般春秋两季各一次 ， 少数法国斗牛犬一年只发情一次 ， 有的发情 3 次 。 法国斗牛犬 发情期主要表示为阴门水肿 ， 血性分泌物 ， 接受爬跨交配 。 法 国斗牛犬最初发情可出现在 7～8 月龄 ， 发情期平均 9～12d， 发 情后期配种率较高 ， 即法国斗牛犬出现血性分泌物后第 9～12 天若交配极有可能怀孕 。
通过孕酮的测定与阴道细胞学检查确定母犬发情与否 ， 以 及所处的发情阶段并帮助确定最佳配种时间 。
- 1 实验材料
1.1 实验动物
选取年龄在 2～4 岁 ， 精 神 良 好 ， 食 欲 正 常 ， 在 2017.10～ 2018.4 就诊于泰爱牧教学宠物医院的法斗母犬共 16 例 。 就诊 主要检测犬发情期变化及孕酮测定 。
1.2 实验仪器及材料
麦克奥迪显微镜 、 孕酮检测仪 。 Diff-quik 染液一套 ， 购自 上海纳博科临动物临床检验实验室 ； 孕酮检测试剂盒 ， 购自北 京德诺泰克科技有限公司 。
- 2 实验方法
2.1 阴道涂片观察
2.1.1 采样
实验犬保定好后 ， 阴道口周围清洁干净 ， 将浸泡过生理盐 水的灭菌棉签插入阴道 4～6cm， 轻轻转动棉签 2～3 次 ， 以保证 棉签能充分接触阴道上皮细胞 。
2.1.2 染色
将采集好的棉签阴道内 容 物 均 匀 涂 抹 在 玻 片 上 ， 自 然 晾 干 ， diff-quik 染色 。 首先 ， 将要染色的涂片完全干燥之后放入 固定液 （diff-quik A） 中 10～20s； 然后 ， 将涂片从固定液中取 出 无 需 冲 洗 可 直 接 放 入 diff-quik B 染 液 中 染 色 5～10s， 要 使
diff-quik B染液均匀染色玻片, 无需冲洗; 最后, 将从玻片从diff-quik B液中取出直接放入diff-quik C染液中染色 5～10s,要使diff-quik C染液均匀染色玻片。 将玻片取出后用生理盐水冲洗去剩下的染液, 自然晾干即可, 镜检 [4]。
2.1.3 镜检观察
每天记录发情母犬血样分泌物颜色及分泌量, 阴唇肿胀程度等。 显微镜下观察阴道涂片, 主要观察角质化上皮细胞的形态、 边缘、 核膜, 并对角质化上皮细胞比例进行统计。
2.2 血清孕酮测定
实验犬保定, 剃毛, 消毒, 前肢头静脉采血2ml, 12000r/ min离心3min分离, 离心提取血清, 用移液器抽取50μl血清加入稀释液混合均匀后抽取100μl混合液, 滴到试剂卡加样孔上, 待混合液从圆孔流到前端空格处, 将试剂卡插入荧光仪卡槽内, 点击荧光仪屏幕上的 “开始测试”, 10min读取检测结果。
- 3 结果与分析
3.1 阴道涂片细胞形态变化
发情前期 (持续6 ～11d): 有大量红细胞和副基底上皮细胞出现, 发情期继续发展会出现红细胞数量逐渐减少, 但上皮细胞会出现角化迹象并且会逐渐增加。 到发情前期的晚期时, 几乎所有的上皮细胞都会表现为伴有核固缩的中间细胞, 也有时会出现少量的嗜中性粒细胞[8](见图1)。
发情期 (持续5～9d): 所有的鳞状上皮细胞为角化状态,一般呈多边形, 不规则, 角化程度不一, 着色情况也不一致。通常无核或有一个 “影核” 或者固缩的小核残体; 随着发情的持续, 至发情配种后时可达到75%以上, 发情期结束后会逐渐下降[7]。 无中性粒细胞, 可能出现少量的红细胞; 发情末期时红细胞会持续下降, 同时嗜中性粒细胞会急剧上升 (见图2)。
发情间期 (56～60d): 角化的鳞状上皮细胞数量急剧下降,中间细胞和副基底细胞再次出现, 嗜中性粒细胞数量的增加,有时可见一些红细胞 (见图3)。
3.2 血清孕酮的结果
3.2.1 血清孕酮水平
本次试验对泰爱牧宠物医院临床孕酮检测的16例法斗母犬进行分析, 主述所有犬均处于发情期。 按照犬场惯例, 首次阴道排血记录为第一天发情。 所有犬孕酮测定均在发情第12～ 14天内检测[5]。 所有犬均采用人工授精方式配种, 配种时间均
在 孕 酮 测 定 后 48h 内 完 成 。 一个月后回访 ， 编号 3、 5、 8、 12 犬配种不成功 ， 其他 犬 只 都 配 种 成 功 。 成 功 率 75%。 配种成功的犬在发情 12～14d 检测孕酮值均处 25～ 45ng/ml， 配种不成功的犬孕 酮 均 超 过 45ng/ml。 由 图 表 明孕酮测定值在 20～40ng/ml 时 是 最 佳 配 种 期 （ 见 附 表 、 见图 4）。
- 4 讨论与分析
4.1 阴道 鳞 状 上 皮 细 胞 角化程度可确定配种时间
资料表明 ， 鳞状上皮细 胞的角化程度和体内雌二醇 和 孕 酮 浓 度 变 化 息 息 相 关 ， 雌二醇和孕酮水平的变化决 定了鳞状上皮细胞的角化程度 [10] 。 犬在发情开始后的 9～12d 雌 二醇达到峰值 ， 之后逐渐下降 ， 孕酮浓度在发情前期开始后的 9～12d 也开始升高 ， 在此期间 ， 通过对阴道涂片的连续观察发 现 ， 发情母犬随着时间推移 ， 角化细胞数量在逐渐增多 ， 发情 后第 10～ll 天可达 80%～90%， 可维持 2～3d， 随后开始逐渐减少 消失 [6] 。 因此 ， 可以通过观察阴道上皮细胞的角化程度来大致 确定配种时间 。
4.2 孕酮测定确定配种时间
孕酮由黄体分泌 ， 属于甾体激素 ， 在排卵 、 妊娠 、 分娩 、 乳腺发育等各方面都发挥着至关重要的作用 [9] 。 孕酮在犬发情 前期浓度较低 ， 且上升缓慢 ， 一般维持在 1～5ng/ml。 孕酮达到 5ng/ml 时犬一般开始排卵 。 在发情期 ， 随着雌二醇浓度下降 ， 孕酮浓度会逐渐上升 ， 孕酮浓度达到 25～45ng/ml 时达到最佳配 种时间 ， 孕酮值上升至 20ng/ml 时可进行第一次配种 ， 48h 后 可进行第二次配种 ； 孕酮浓度达到 25～40ng/ml 时建议 2～3h 后 配种 ， 48h 后可进行第二次配种 ， 以提高配种成功率 。 孕酮测 定值达到 45ng/ml 时 ， 说明犬已进入发情后期 ， 不建议配种 。
鉴定母犬发情的方法常用阴道涂片和孕酮测定法 ， 每一种 方法均有其优缺点 [11] 。 要准确把握犬的配种时间 ， 建议同时使 用两种方法一起判断 。 同时 ， 犬的发情会受到年龄 、 营 养 状 况 、 生活环境 、 光照等多种的条件会影响犬的发情 ， 在生产实 践中 ， 应根据犬实际情况综合推断犬最佳配种时间 [12] 。
- 参考文献：
[1] 王利刚,狄和双,王丽华,等.贵宾犬最佳配种时间的判断[J].畜牧与兽医,2014(12):94-96.
[2] 程占军 ,马大君 ,方建强 ,等 .德国牧羊犬和拉布拉多犬发情期血清生殖 激素的变化及其配种时间的选择[ J].畜牧与兽医 ,2015(12):129-133.
[3]梁书文,张卫宪.宠物繁殖[M].北京:中国农业科学技术出版社,2008.
[4] 赵远良 ,岳城 ,丑城江 .犬病鉴别诊断与防治 [M].北京 :金盾出版社 ,2008.
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[6] 刘颖,宋丹,呼格吉乐图,李云章.犬的妊娠期内分泌[J].畜牧与饲料科学,2014(10):99-102.
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[10] 董佳涵 , 朱淑文 , 周新初 , 等 . 成年雌性比格犬发情期中生殖激素变化 规律[ J].上海交通大学学报 :农业科学版 ,2011(5):83-86.
[11] 林嘉宝 , 陈宋杰 , 黄薇 , 等 . 犬发情期血清孕酮水平与最佳配种时间的 测定[ J].中国兽医杂志 ,2017(2):70-72.
[12] 贾佳丽 ,王辉 ,韩飞 ,等 .犬孕酮几种检测方法比较 [J].河南畜牧兽医 : 综 合版, 2016(4):42-43.