猪支原体肺炎IgA抗体ELISA检测方法的建立及应用
兆丰华生物科技(福州)有限公司
- 摘 要：
- 为更好地了解猪群猪肺炎支原体感染或免疫情况,本研究将猪肺炎支原体168株P97R1基因序列连接至PET-32a载体中进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定后,获取重组蛋白,将重组蛋白作为包被用抗原建立检测猪鼻拭子中Mhp IgA抗体的间接ELISA方法。结果显示,经诱导表达成功获取大小约35 kDa可溶性表达的重组蛋白,该蛋白能与His标签抗体发生特异性结合。采用重组蛋白作为包被用抗原建立的ELISA方法优化结果显示:重组蛋白的最佳包被浓度1.0 ug/mL,待检样品最佳稀释比例为1:25,该方法特异性好、灵敏度高,与临床实际情况以及PCR检测结果具有很好的符合度。结论:采用构建的P97R1重组蛋白包被抗原建立的IgA抗体检测方法具有很好的特异性和灵敏度。
关键词：猪肺炎支原体;诱导表达;IgA抗体;
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