星突江鲽胰岛素样生长因子Ⅱ的原核表达与生物活性分析
中国水产科学研究院黄海水产研究所
- 摘 要：
- 根据鲽形目和鲈形目鱼类的IGF-Ⅱ基因保守序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆得到编码星突江鲽(Platichthys stellatus) IGF-Ⅱ成熟肽的全长cDNA序列(210 bp),同源性分析显示IGF-Ⅱ成熟肽在B、A和D区高度保守.利用原核表达载体pET-28a构建了重组表达质粒(IGF-Ⅱ/pET28a),转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,获得了N端含6个组氨酸的重组蛋白.37℃条件下用1.0 mmol/L的IPTG诱导6h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的42.7%.重组蛋白主要以包涵体形式存在,经SDS-PAGE电泳检测,IGF-Ⅱ重组蛋白大小为11.4 kD,Western-Blotting免疫印迹呈阳性.包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后,获得了纯化IGF-Ⅱ蛋白.细胞增殖实验结果显示,重组蛋白可显著促进人胚胎肾细胞HEK293T的增殖,表明获得的IGF-Ⅱ重组蛋白具有细胞水平的生物活性.研究结果为深入研究星突江鲽IGF-Ⅱ的功能提供了基础资料.
关键词：星突江鲽;IGF-Ⅱ;原核表达;生物活性
相似文章
-
星突江鲽染色体核型分析 [李迪, 陈四清, 刘志鸿, 谭杰, 庄志猛, 张秀梅, 刘长琳, 常青] 渔业科学进展 2009,30 (2) 20-25
-
星突江鲽胚胎发育的研究 [陈四清, 刘长琳, 庄志猛, 邹健, 李学文, 李迪, 齐国山] 渔业科学进展 2009,30 (1) 1-7
-
不同地理群体星突江鲽养殖子一代群体遗传多样性分析 [马爱军, 李晨, 王新安, 侯仕营] 渔业科学进展 2009,30 (5) 1-5
-
星突江鲽精子的超微结构 [刘长琳, 庄志猛, 陈四清, 邹健, 李学文] 渔业科学进展 2009,30 (4) 14-20
-
星突江鲽卵巢中常量及微量元素分析 [齐国山, 陈四清, 庄志猛, 刘长琳] 水产学杂志 2008,21 (2) 73-76
-
pH值对星突江鲽消化酶活性的影响 [李文雯, 孟一耕, 王娜, 张韦, 崔宽宽, 尤宏争] 饲料工业 2012,33 (20) 18-22
-
星突江鲽(Platichthys stellatus)、石鲽(Kareius bicoloratus)及其正反杂交种肌肉的营养成分分析及评价 [曹栋正, 张小忠, 陈四清, 秦搏, 常青, 刘长琳, 柳茜, 吕云云] 渔业科学进展 2016,37 (3) 34-41
-
星突江鲽胰岛素样生长因子II的原核表达与生物活性分析 [臧坤, 徐永江, 柳学周, 史宝, 王妍妍] 中国水产科学 2015,22 (2) 214-223
-
星突江鲽的形态特征及内部结构研究 [齐国山, 李迪, 陈四清, 庄志猛, 刘长琳, 宋宗诚, 邓永生] 中国水产科学 2008,15 (1) 1-11
-
星突江鲽和石鲽正反杂交种的形态变异分析 [曹栋正, 陈四清, 严俊丽, 刘长琳, 王志军, 燕敬平] 中国水产科学 2016,23 (4) 871-881
