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稳定表达LamR的RK13细胞系的建立及RHDV吸附能力的初步研究

作  者:
黄萍;宋艳华;胡波;魏后军;范志宇;仇汝龙;陈萌萌;薛家宾;王芳;JUNG Yong-Sam
关键词:
慢病毒载体;Lam R;RK13细胞;兔出血症病毒
摘  要:
为建立稳定表达层黏连蛋白受体(LamR)RK13细胞系(RK13-LamR),并研究LamR蛋白在兔出血症病毒(RHDV)与宿主细胞结合中的作用,将完整的LamR序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-m Cherry,并将该重组质粒pLVX-m Cherry-LamR与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒.将收获的重组病毒感染RK13细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达LamR蛋白的RK13细胞.通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting证明所获细胞株能够稳定表达LamR蛋白,将细胞株命名为RK13-LamR.以纯化的RHDV接种RK13-LamR细胞,IFA检测结果显示,LamR蛋白能促进RHDV对RK13细胞的吸附.本研究建立了RHDV相对敏感的细胞株,证实在RHDV吸附宿主细胞的过程中,LamR蛋白起到一定的作用.
单  位:
HUANG Ping%SONG Yanhua%HU Bo%WEI Houjun%FAN Zhiyu%QIU Rulong%CHEN Mengmeng%XUE Jiabin%WANG Fang%JUNG Yong-Sam%MOE Joint International Research Laboratory of Animal Health and Food Safety,College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University%Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural sciences/Key Laboratory for Veterinary Bio-Product Engineering,Ministry of Agriculture

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