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SARS冠状病毒PUP5蛋白的表达、纯化及鉴定

作者：

王红霞;孟庆文;刘永刚;施建忠;孔宪刚;冉多良;吴东来

单位：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;新疆农业大学动物医学院

关键词：

SARS冠状病毒;PUP5蛋白;表达

摘要：

经RT-PCR扩增了SARS冠状病毒(SARS-CoV)BJ01株的PU5基因(putativeuncharacterizedgene5)的cDNA,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,命名为pGEX-PU5,测序正确后将阳性质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白命名为pGEX-PUP5,并用GlutathioneSwpharoseTM4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,然后用PreScissionTMProtease酶对融合蛋白进行解离,获得PUP5蛋白,用抗SARS-CoV卵黄抗体IgY和GST-tag单克隆抗体分别对表达的目的蛋白做Westernblot鉴定,证明所表达的蛋白具有免疫学活性。本研究应用原核表达系统表达了PUP5蛋白,为进一步解析该蛋白功能奠定了基础。

译名：

Expression,purification and identification of SARS coronavirus putative uncharacterized protein 5

作者：

WAHG Hong-xia1,2,MENG Qing-wen1,Liu Yong-gang1,SHI Jian-zhong1,KONG Xian-gang1,RAN Duo-liang2,WU Dong-lai1*(1.National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150001,China;2.Department of Veterinary Medicine,Xinjiang Agriculture University,Urumchi 830052,China)

关键词：

SARS-CoV;PUP5 protein;expression

摘要：

The complementary DNA of putative uncharacterized gene 5(PU5)was prepared from SARS coronavirus(SARS-CoV)gene RNA by RT-PCR.The amplified fragment was cloned into the plasmid vector pGEX-6P-1.The recombinant vector was designated pGEX-PU5.The putative uncharacterized protein 5(PUP5)of SARS-CoV was expressed in E.coli as fusion protein with GST protein at N-terminus.The recombinant protein was identified by Western blot.The soluble parts of the cell extract were then purified by Glutathione SwpharoseTM 4B and purified putative uncharacterized protein 5 was harvested by PreScissionTM Protease witch cleaved the purified protein.

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