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杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析

作者：

王喜军;胡森;王清华;邓国华;王笑梅;吴东来;申之义;步志高

单位：

内蒙古农业大学动物科学与医学学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

关键词：

SARS冠状病毒;纤突蛋白;重组杆状病毒;ELISA;IFA

摘要：

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性。结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础。

译名：

Antigenicity of recombinant spike protein of SARS-coronavirus expressed in baculovirus

作者：

WANG Xi-jun~(1,2),HU Sen~1,WANG Qing-hua~(1,2),DENG Guo-hua~1,WANG Xiao-mei~1,WU Dong-lai~1,SHEN Zhi-yi~2,BU Zhi-gao~(1*)(1.Key Laboratory of National Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agriculture Science,Harbin 150001,China;2.College of Animal Science and Animal Medicine,Inner Mongolia Agriculture University,Hohhot 010018,China)

关键词：

SARS-CoV;spike protein;recombinant baculovirus;ELISA;IFA

摘要：

A recombinant baculovirus(rBac-SS)expressing spike protein of severe acute respiratory syndrome coronavirus was constructed.The expression of full length recombinant spike protein(rSS) in insect cells was confirmed by SDS-PAGE and Western-blot(～190?Ku).When lysis supernatant of rBac-SS infected insect cells was directly used in ELISA as coating antigen for detecting specific antibodies in convalesce serum of SARS-CoV infected patient,the rSS showed the same sensitivity as the cell lysis of vero E6 infected with SARS-CoV.Insect cell infected with rBac-SS also showed highly sensitivity to detect specific serum antibody by indirect immunofluoresence assay(IFA).The results here indicated that baculovirus expressed rSS is promising to replace the whole SARS-CoV as antigen in ELISA and IFA for detecting the SARS-CoV specific antibodies and potential subunit vaccine candidate.

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