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利用免疫共沉淀验证肌纤维形成相关蛋白CFL2与MEF2C的相互作用

作  者:
许晶;朱弘焱;田玉民;苏玉虹
单  位:
辽宁医学院畜牧兽医学院
关键词:
CFL2;MEF2C;载体构建;相互作用;免疫共沉淀
摘  要:
利用免疫共沉淀技术验证丝切蛋白(CFL2)和肌细胞增强因子-2(MEF2C)之间的相互作用关系。构建带绿色荧光蛋白(GFP)的p EGFP-N1-CFL2和p Lenti6.3_MCS_IRES2-EGFP-his-MEF2C重组载体,经双酶切鉴定正确后,分别将上述重组载体共转染至人宫颈癌细胞(Hela),利用免疫共沉淀方法验证CFL2和MEF2C之间的相互作用关系。结果表明,p EGFP-N1-CFL2和p Lenti6.3_MCS_IRES2-EGFPhis-MEF2C重组载体共转染Hela细胞,分别用抗CFL2和抗MEF2C抗体沉淀蛋白复合物,用MEF2C和CFL2抗体进行Western blot检测,检测到p Lenti6.3_MCS_IRES2-EGFP-his-MEF2C和p EGFP-N1-CFL2的表达。本试验成功构建p EGFP-N1-CFL2和p Lenti6.3_MCS_IRES2-EGFP-his-MEF2C真核表达重组载体,在Hela细胞中表达后利用免疫共沉淀的方法证实了CFL2和MEF2C之间存在相互作用。

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