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白假丝酵母环核苷酸磷酸二酯酶2的异源表达、纯化与酶学特性分析

作  者:
李赤霞;陈滢;张萌;陈玉娟;田元元;王友升
单  位:
北京食品营养与人类健康高精尖创新中心
关键词:
白假丝酵母;环核苷酸磷酸二酯酶;表达纯化;高效液相色谱
摘  要:
为获得白假丝酵母(Candida albicans)环核苷酸磷酸二酯酶2(phosphodiesterases 2,PDE2),以C.albicans基因组为模板,经聚合酶链式反应扩增获得目的基因,构建重组质粒pET28a-C.albicans pde2,转化至大肠杆菌BL21中,获得稳定表达的基因工程菌.所表达的蛋白通过亲和层析柱(Ni-NAT)、离子交换层析柱(Q-Sepharose)和分子筛层析柱(Sephacryl S200)逐步进行纯化.应用高效液相色谱方法测定纯化的PDE2蛋白(约62 kDa)对单底物及双底物的水解特性,证明PDE2在0.385 mg/mL质量浓度下,对0.4 mmol/L cAMP和cGMP的水解率达到60%~70%,且对底物cAMP具有更高的亲和力,并确定该酶具有较高生物学活性和稳定性,为该蛋白的晶体学解析及在C.albicans中的生理病理机制研究提供理论依据.
译  名:
Heterologous Expression, Purification and Enzymatic Analysis of Candida albicans Cyclic Nucleotide Phosphodiesterase 2

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