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1株蜡样芽孢杆菌噬菌体的分离与生物学特性分析

作  者:
谢丹莹;贾超祥;杨晨;张赛宇;刘一;李和平;郭爽;王月影
单  位:
河南农业大学动物医学院农业农村部动物生化与营养重点实验室
关键词:
蜡样芽孢杆菌;噬菌体;分离;纯化;生物学特性;耐受性;裂解谱
摘  要:
为获得蜡样芽孢杆菌噬菌体并了解其生物学特性,试验多位点采集河南省郑州市贾鲁河河边水样20份,混合后,以蜡样芽孢杆菌临床分离株LY为宿主菌,采用点滴法和双层平板法从水样中分离、纯化噬菌体,利用负染法在透射电镜下观察噬菌体形态,并对分离到的噬菌体进行最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)的测定、一步生长曲线的绘制、耐受性试验(温度、pH值)及裂解谱分析。结果表明:从水样中分离到1株蜡样芽孢杆菌噬菌体,根据形态判断该噬菌体为有尾病毒目(Caudovirales)肌尾病毒科(Myoviridae),命名为vB_Bac1。经测定噬菌体vB_Bac1最佳MOI为1。在一步生长曲线中,噬菌体vB_Bac1的潜伏期为20 min,裂解期为60 min,其效价在孵育40 min时达到第一个高峰,在孵育60 min时再次升高,在孵育80 min时达到第二个高峰。噬菌体vB_Bac1在4~60℃条件下水浴1 h,效价在1.12×10~7~2.12×10~8 pfu/mL之间;但在70℃条件下水浴1 h即可完全失活。在pH值为4~11条件下孵育1 h,效价在1.13×10~6~2.12×10~8 pfu/mL之间;当pH值为6时,效价最高(2.12×10~8 pfu/mL);当pH值为2,3,12时,噬菌体vB_Bac1完全失活。噬菌体vB_Bac1仅能裂解其宿主菌——蜡样芽孢杆菌LY,无法裂解蜡样芽孢杆菌Y01及粪肠球菌和金黄色葡萄球菌的所有受试菌株。说明试验分离到1株有尾病毒目肌尾病毒科蜡样芽孢杆菌噬菌体,该噬菌体具有较好的耐酸碱能力,但对高温环境的耐受能力较差,且具有较强的宿主特异性。

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