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当前位置: 首页 > 文章 > 蓝舌病病毒和鹿流行性出血热病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立 中国兽医科学 2017 (9) 1124-1128
Position: Home > Articles > Establishment of a duplex real-time RT-PCR for simultaneous detection of BTV and EHDV Chinese Veterinary Science 2017 (9) 1124-1128

蓝舌病病毒和鹿流行性出血热病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作  者：
刘佳佳;王慧煜;艾军;韩雪清
单  位：
云南出入境检验检疫局检验检疫技术中心;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所
关键词：
蓝舌病病毒;鹿流行性出血热病毒;双重荧光定量RT-PCR
摘  要：
为建立可同时检测蓝舌病病毒(BTV)和鹿流行性出血热病毒(EHDV)的快速诊断方法,本研究根据BTV和EHDV保守基因序列设计特异性引物和探针,建立了双重荧光定量RT-PCR,对该方法进行反应条件、特异性及敏感性的验证,并用该方法对部分已知临床样品进行检测。结果显示,该方法与口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒、小反刍兽疫病毒等牛、羊常见疾病病原无交叉反应;对两种重组质粒标准品的检出极限均为1×10~2copies/L;批内和批间重复试验的变异系数均小于2.55%。临床试验表明,该方法能够快速准确地检测出临床组织样品中BTV和EHDV的核酸。结果表明,本研究建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以为BTV和EHDV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。
译  名：
Establishment of a duplex real-time RT-PCR for simultaneous detection of BTV and EHDV
作  者：
LIU Jia-jia;WANG Hui-yu;AI Jun;HAN Xue-qing;The Institute of Animal Quarantine,Chinese Academy of Inspection and Quarantine;Yunnan Entry-Exit Inspection and Quarantine Burea;
关键词：
bluetongue disease virus;;epizootic hemorrhagic disease virus;;duplex real-time RT-PCR
摘  要：
To develop a method for simultaneous detection of Bluetongue disease virus (BTV) and Epizootic hemorrhagic disease virus (EHDV),a duplex real-time RT-PCR was established with the specific primers and Taq Man fluorescent probes designed according to the conserved gene sequences of BTV and EHDV.The reaction conditions,specificity and sensitivity of this method were optimized.Clinical samples were collected for verification of this method.The results showed that the assay was highly specific and sensitive with the detection limit of 1×10~2 copies/L for BTV and EHDV,but no amplification for FMDV,VSV,SBV,PPRV,GTPV and SPPV.In addition,the coefficient of variation was less than 2.55% for both intra-assay and inter-assay.Moreover,clinical test showed that the method could accurately detect the nucleic acids of BTV and EHDV in clinical tissues.It is indicated that the duplex real-time RT-PCR can be used as an effective tool for rapid detection and epidemic surveillance of BTV and EHDV.

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