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鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

作  者:
汪铭锐;吴俊花;王飞;邵红霞;钱琨;叶建强;秦爱建
单  位:
扬州大学兽医学院教育部禽类预防医学重点实验室
关键词:
鸡传染性贫血病毒;VP2蛋白;单克隆抗体;抗原表位
摘  要:
拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV) VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂.以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中,经IPTG诱导表达.以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳性杂交瘤细胞;采用截短表达CIAV VP2基因方法鉴定mAb识别的抗原表位.结果 显示:成功获得了1株能稳定分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的杂交瘤细胞株,并命名为CIAV VP24A12;亚类鉴定结果表明,该mAb重链为IgG1型,轻链为kappa链;Western blot结果显示,该mAb可以识别大肠杆菌,Sf9细胞和转染pCAGGS-VP2-Flag的DF1细胞中表达的VP2蛋白.使用原核表达截短蛋白进行表位鉴定,发现该mAb识别抗原表位序列是1555KTVRW159,序列比对发现该表位在CIAV中高度保守.本研究成功制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性mAb,并精确鉴定了其识别表位,为VP2蛋白功能的研究以及CIAV的诊断方法研发提供了有效工具.
译  名:
Development and Epitope Identification of a Monoclonal Antibody against VP2 Protein of Chicken Infectious Anemia Virus

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