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非洲猪瘟病毒pS273R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作  者:
赵改红;李婷婷;张涛清;陈欣;王晓;李长尧;张朝霞;郑君;翁长江
单  位:
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室基础免疫创新团队
关键词:
非洲猪瘟病毒(ASFV);pS273R蛋白;多克隆抗体;
摘  要:
本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV) pS273R蛋白,并制备其多克隆抗体,为ASFV pS273R的功能研究提供材料。试验通过大肠杆菌表达系统表达重组pS273R蛋白,采用镍亲和层析柱和分子筛纯化重组pS273R蛋白并免疫BALB/c小鼠制备血清,经Protein G琼脂糖树脂纯化鼠抗pS273R蛋白多克隆抗体,通过Western blotting、间接免疫荧光(IFA)和免疫沉淀试验(IP)分析多克隆抗体的反应原性和特异性。结果显示,在16℃、1 mmol/L IPTG诱导条件下,pS273R蛋白以可溶形式高效表达,经纯化并免疫小鼠后,通过Protein G可以纯化出高质量的鼠抗pS273R的多克隆抗体。以制备的多克隆抗体为一抗,通过Western blotting、IFA和IP检测到HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-pS273R蛋白和ASFV感染肺泡巨噬细胞(PAMs)中的pS273R蛋白。本研究在大肠杆菌中实现了ASFV pS273R蛋白的高效表达,制备并纯化的抗pS273R多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,这为深入探讨ASFV pS273R蛋白的生物学功能奠定了基础。

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