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水环境中诺如病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用

作者：

罗鸿斌

单位：

东莞理工学院

关键词：

诺如病毒;逆转录;环介导等温扩增

摘要：

[目的]基于诺如病毒(NV)基因保守区,设计一套RT-LAMP简并引物,建立能简便、特异、灵敏检测水环境样品中NV的一步法RT-LAMP技术。[方法]通过试验,优化反应温度(64℃)、反应时间(40 min)、Mg2+浓度(2 mmol/L)等参数,建立反应体系。[结果]该方法只需1台水浴锅在1 h内即可完成检测,可直接用肉眼观察结果,检测灵敏度比普通RT-PCR高100倍;简并引物的设计增强了特异性,可检测多个血清型的NV。[结论]在样品检测中,RT-LAMP技术的灵敏度达97.7%,高于RT-PCR的90.7%,更适用于野外样品和简陋实验室的快捷检测。

译名：

Establishment and Application of RT-LAMP Rapid Detection Method for Norwalk Virus in Water Environment

作者：

LUO Hong-bin;Dongguan University of Technology;

关键词：

Norwalk virus;;Reverse transcription;;Loop-mediated isothermal amplification

摘要：

[Objective]Based on norovirus(NV) gene conserved region,to design a RT-LAMP degenerate primer,and to establish a simple,specific and sensitive method for the determination of NV in water environment samples by RT-LAMP.[Method]Through experiments,the reaction system was established by optimizing reaction temperature(64 ℃),reaction time(40 min) and Mg~(2+) concentration(2 mmol/L).[Result]The method only needed a water bath to complete the test in an hour,and could be observed directly with the naked eye,and the sensitivity was 100 times higher than that of the ordinary RT-PCR.The design of degenerate primers enhanced specificity and could detect multiple serotypes of NV.[Conclusion]In the sample detection,the sensitivity of RT-LAMP technology was 97.7%,higher than 90.7% of RTPCR.It was more suitable for rapid detection of field samples and crude Laboratory.

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