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猪β防御素2与α干扰素重组融合蛋白的表达及其活性评价

作者：

雷白时;李秀丽;康佳梦;张会文;李伯森;赵款;张武超;梁飞;袁万哲

单位：

石家庄市动物基因工程药物技术创新中心;河北农业大学;承德市兽药管理站

关键词：

猪β防御素2;猪α干扰素;重组融合蛋白;抗细菌;抗病毒

摘要：

为获得同时具有广谱抗细菌和抗病毒活性的猪β防御素2（PBD2）与猪α干扰素（PoIFN-α）重组融合蛋白，将2种蛋白的基因串联融合后插入pPICZαA载体，电转导入KM71H毕赤酵母细胞构建工程菌，经甲醇诱导表达后，浓缩分离重组蛋白，MTT法和猪红细胞溶血试验测定其细胞毒性，并对重组融合蛋白的体外抗细菌和抗病毒活性进行评价。结果显示，成功获得了pPICZαA-PBD2-IFNα-KM71H毕赤酵母工程菌株，经诱导、表达、浓缩纯化后的融合蛋白PBD2-IFN-α的质量浓度为1.116 g/L,相对分子质量为25 kDa,当蛋白质量浓度低于4^-4 g/L时对PK-15细胞和猪红细胞无明显毒性，融合蛋白在大肠杆菌或金黄色葡萄球菌混菌平板上产生的抑菌圈直径为（15.0±0.9）mm,均具有比较明显的抑菌活性，Reed-Muench法计算融合蛋白在PK-15中对水泡性口炎病毒（VSV）的抗病毒活性为8.89×10～5 U/mL。为进一步开发该重组融合蛋白作为抗细菌和抗病毒产品奠定了理论基础。

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