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中华鳖StAR基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

作  者:
刘倩;马晓;岑双双;田雪;王璐明;吴利敏;刘慧芬;李学军
单  位:
河南师范大学水产学院
关键词:
中华鳖;StAR基因;克隆;表达;性腺;多克隆抗体
摘  要:
为探索StAR基因在中华鳖性腺发育过程中的作用,利用RACE技术克隆获得中华鳖StAR基因全长cDNA,qRT-PCR分析其在不同组织及胚胎不同发育时期的表达情况,并制备多克隆抗体,采用Western blot检测StAR在不同组织中的表达情况,通过免疫组化进行定位,同时检测来曲唑处理雄性中华鳖后StAR在精巢中的表达情况.结果显示,该基因全长2377 bp,开放阅读框903 bp,编码300个氨基酸.氨基酸序列比对及系统进化分析表明,中华鳖StAR与龟类亲缘关系最近.实时荧光定量PCR结果表明,StAR基因在精巢中表达量最高,显著高于其他组织;StAR基因于中华鳖胚胎发育16期已有表达,早于性腺分化启动时期;来曲唑处理的中华鳖精巢中,StAR表达量先上调后回降.本研究利用原核表达系统构建中华鳖StAR基因原核重组表达载体,经蛋白纯化后免疫小鼠,获得中华鳖StAR多克隆抗体.Western blot检测结果显示StAR在不同组织中的表达量与荧光定量结果一致.免疫组化结果显示,StAR蛋白在卵巢间质细胞、精巢间质细胞,精原细胞及胞质中表达.综上所述,StAR基因可能是中华鳖性腺分化关键调控因子,并在类固醇激素合成及精子发生过程中起到重要作用.
译  名:
Molecular cloning, expression analysis and polyclonal antibody preparation of StAR gene in Chinese soft-shelled turtle (Pelodiscus sinensis)

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