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草鱼C5a、C5aR和FⅡ多克隆抗体的制备与表达特性

作  者:
苏杭;肖调义;许宝红;刘巧林;吕丽刚;刘益
单  位:
湖南农业大学
关键词:
草鱼;C5a;C5aR;FⅡ;多克隆抗体;草鱼呼肠孤病毒(GCRV);表达特性
摘  要:
为研究草鱼补体蛋白5a(complement component 5a,C5a)、补体蛋白5a受体(C5a receptor,C5aR)和凝血因子Ⅱ(blood coagulation factorⅡ,FⅡ)在感染草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)时的蛋白表达和相互作用,针对草鱼C5a和FⅡ蛋白构建了原核表达体系、针对草鱼C5aR蛋白构建C5aR-KLH偶联物,纯化蛋白,免疫日本大耳白兔制备3种蛋白的多克隆抗体.用蛋白质印迹(Western blot)、免疫共沉淀(Co-IP)和拉下(pull down)实验检测3种蛋白表达与互作关系,Western blot结果显示,C5a和C5aR在健康草鱼的肝脏、脾脏、肾脏、头肾、肠、鳃和肌肉中均有蛋白表达,FⅡ在肝脏、脾脏和肠中表达,而在肾脏、头肾、鳃和肌肉中不表达;在感染GCRV的草鱼肝脏组织中C5a、C5aR和FⅡ蛋白均随病程进展呈现上升趋势.Co-IP结果显示,在GCRV处理后,C5a、C5aR和FⅡ蛋白具有相互作用关系.pull down结果显示,C5a pull down共鉴定得到C3、RIG-I等28种候选蛋白,C5aR pull down共鉴定得到转醛醇酶、巨球蛋白等24种候选蛋白.该研究为深入探讨C5a、C5aR和FⅡ互作调控关系以及进一步探索补体和凝血级联系统中3个关联蛋白响应GCRV感染的作用机制奠定了基础.
译  名:
Preparation and expression characteristics of polyclonal antibodies against C5a, C5aR and FⅡ in grass carp (Ctenopharyngodon idella)

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