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草鱼CD8α、CD207基因重组真核表达质粒的构建与表达分析

作  者:
田丁;李珂珂;蒋飞;陈春秀;念子清;吴志新;陈孝煊
单  位:
华中农业大学水产学院
关键词:
草鱼;树突状细胞;CD8α;CD207;真核表达质粒
摘  要:
为进一步研究CD8α、CD207在草鱼树突状细胞(dendritic cells,DCs)中的功能,实验构建了草鱼CD8α、CD207基因重组真核表达质粒并在草鱼DCs中成功表达.采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从草鱼DCs中获得CD8α、CD207开放阅读框序列(ORF),分别插入真核表达质粒pcDNA3.1,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207;经测序鉴定正确后,采用脂质体法将重组真核表达质粒分别转染至草鱼树突状细胞,经细胞免疫荧光技术和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证CD8α、CD207的表达.结果显示,在蛋白免疫印迹实验中CD8α、CD207蛋白可正常表达,且大小与预测结果一致.细胞免疫荧光结果显示,CD8α、CD207蛋白主要在草鱼DCs的细胞膜上表达.本研究成功构建pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207重组真核表达质粒,为后续研究CD8α、CD207基因在DCs中的作用机制奠定了基础.
译  名:
Construction and expression analysis of recombinant eukaryotic expression plasmids of CD8α and CD207 genes in Ctenopharyngodon idella

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