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巴斯德毕赤酵母多拷贝整合表达组装禽流感病毒样颗粒

作  者:
薛倩;马文戈;沙依兰·卡依扎;汪萍;韩涛;苗书魁;夏俊;陆桂丽
单  位:
新疆畜牧科学院兽医研究所/新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心;新疆农业大学动物医学学院
关键词:
禽流感病毒;多拷贝整合;病毒样颗粒
摘  要:
[目的]构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5 N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础.[方法]以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达质粒p8K.再以禽流感病毒H5N1毒株基因组RNA为模板,RT-PCR扩增HA、M和NA基因,分别插入多拷贝载体p8K,构建表达质粒p8K-HA/M/NA.表达质粒分别扩增后线性化,按比例混合,电转化GS115感受态细胞.增菌后,经遗传霉素G418抗性平板筛选、PCR鉴定携带HA、M和NA基因序列的多拷贝整合菌株.阳性菌株增菌、诱导表达、高压均质破碎后,Western-blot检测表达产物.[结果]PCR鉴定阳性的重组菌株,其细胞裂解蛋白,免疫印迹试验可检测到与HA、M1和NA分子量一致的蛋白条带;电子显微镜可观察到大小约为80~120 nm的病毒样颗粒,免疫鸡能产生抗禽流感病毒中和抗体.[结论]重组毕赤酵母能够多拷贝整合、表达、组装禽流感病毒样颗粒.
译  名:
Avian Influenza Virus-like Particles Expressed and Assembled by Multi-copy Recombinant Pichia Pastoris

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