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当前位置: 首页 > 文章 > H5亚型2.3.4.4分支禽流感病毒HA基因重组质粒的免疫保护效力研究 中国预防兽医学报 2022,44 (1) 53-58,79
Position: Home > Articles > Protective efficacy of DNA recombination plasmid against H5 clade 2.3.4.4 avian influenza virus Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine 2022,44 (1) 53-58,79

H5亚型2.3.4.4分支禽流感病毒HA基因重组质粒的免疫保护效力研究

作  者：
李炯颉;梁真洁;陈普成;曾显营;柳金雄;邓国华;姜永萍;陈化兰
单  位：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
关键词：
DNA疫苗;2.3.4.4分支;禽流感病毒;免疫效力评估
摘  要：
为研制H5亚型禽流感病毒(AIV)流行株的DNA疫苗,本研究将目前流行的H5亚型2.3.4.4分支AIV代表株A/Duck/Guizhou/S4184/2017(H5N6)[简称DK/GZ/S4184/2017(H5N6)]的HA基因经密码子优化后克隆至载体pCAGGs中构建重组质粒pCA-S4184,经PCR和测序鉴定正确后转染293T细胞,利用间接免疫荧光试验和western blot鉴定.结果显示,该HA基因可以在293T细胞中瞬时表达.将15 μg/只的重组质粒pCA-S4184经肌肉注射免疫3周龄SPF鸡,3周后以相同的剂量加强免疫,1周后再通过滴鼻途径分别以105 EID50/0.1 mL/只的同源高致病性AIV(HPAIV)DK/GZ/S4184/2017(H5N6)株和同分支异源 HPAIV DK/GD/S1110/2019(H5N6)、DK/GX/1/2018(H5N6)、DK/HuN/SE0110/2018(H5N6)株攻毒,首免及攻毒后每周采血,检测每组鸡的HI抗体水平.在攻毒后14d的观察期内每天记录各组鸡的发病和死亡情况,攻毒后第3 d、5 d和7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子进行病毒的分离及其滴度的测定.结果显示,加强免疫后各组鸡的平均HI抗体滴度为1∶8~1∶11,攻毒后HI抗体效价均显著增加;pCA-S4184可以对SPF鸡提供抵抗致死性同源病毒和同分支异源病毒攻击的能力,保护率达到100%,且能显著降低SPF鸡的排毒量甚至不排毒.随后以15μg/只的pCA-S4184两次免疫3周龄SPF鸡,免疫后每隔2周采血检测HI抗体的动态消长规律并在首免后第12周和24周,分别随机选取8只免疫鸡和8只对照鸡通过滴鼻途径以105EID50/0.1 mL/只感染同源HPAIVDK/GZ/S4184/2017(H5N6)株,并在攻毒后第3d、第5 d和第7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子,分离病毒并测其滴度,以评估该重组质粒在免疫持续期间所诱导的免疫保护效果.结果显示,重组质粒仍可以使免疫鸡完全抵抗同源病毒的攻击.本研究为重组质粒pCA-S4184作为防控H5亚型2.3.4.4分支禽流感的候选DNA疫苗提供了实验依据.
译  名：
Protective efficacy of DNA recombination plasmid against H5 clade 2.3.4.4 avian influenza virus

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