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H9亚型鸭源禽流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立

作者：

万春和;林甦;施少华;林秋敏;陈红梅;程龙飞;傅光华;林芳;林建生;黄瑜

单位：

福建省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词：

H9亚型禽流感病毒;SYBR GreenⅠ;实时荧光定量PCR(RRT-PCR)

摘要：

针对H9亚型禽流感HA基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-ti me RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为8.33×102拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出100倍。扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(83.83±0.22)℃,组内变异系数为0.52%~1.48%,组间变异系数为0.71%~2.21%,可重复性好;对H5亚型禽流感病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭源禽1型副粘病毒无扩增;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需4.5 h。

译名：

SYBR GreenⅠ RT-PCR for rapid diagnosis of H9 Subtype Avian Influenza Virus

作者：

WAN Chun-he,LIN Su,SHI Shao-hua,LIN Qiu-min,CHEN Hong-mei,CHENG Long-fei,FU Guang-hua,LIN Fang,LIN Jian-sheng,HUANG Yu(1.Institute of Husbandry and Veterinary Medicine,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou,Fujian 350013,China)

关键词：

H9 subtype avian influenza virus;SYBR Green I;RRT-PCR

摘要：

A pair of specific primers targeting hemagglutinin gene of H9 avian influenza virus(AIV) was designed for the development of a SYBR Green I fluorescent based real-time RT-PCR(RRT-PCR) to quantify the H9 subtype AIV for rapid diagnosis.The detection limit of RRT-PCR was 8.33×102 plasmid copies.The melting curve analysis using SYBR Green I dye showed one specific peak at the melting temperature of(83.83±0.22)℃ with no primer-dimers peak.No amplification was detected by this method from the unrelated RNA samples,such as H5 subtype AIV,duck hepatitis virus,duck plague virus or avian paramyxovirus type-1.High reproducibility was obtained for detecting plasmid DNA with intra-assay of 0.52%-1.48% and inter-assay of 0.71%-2.21%.

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