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卵形巴贝斯虫荧光定量PCR方法的建立及初步应用

作者：

田万年;薛书江;贾立军;张守发

关键词：

卵形巴贝斯虫;荧光定量PCR;临床检测

摘要：

为建立一种检测感染牛的卵形巴贝斯虫的敏感、快速方法,本研究根据GenBank中登录的卵形巴贝斯虫18S rRNA保守区设计1对特异引物,通过优化反应条件,建立了检测卵形巴贝斯虫荧光定量PCR方法。结果显示,该方法可以特异地检测出卵形巴贝斯虫DNA,对瑟氏泰勒虫、牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫DNA的检测均为阴性;该方法的灵敏度可达1.26 copies/μL,比普通PCR灵敏度高100倍。组内及组间重复试验的变异系数均小于3%。对60份临床牛血液DNA样本进行检测,荧光定量PCR和常规PCR的阳性检出率分别为41.67%和33.33%。结果表明,本试验建立的荧光定量PCR方法可用于对卵形巴贝斯虫定量分析和卵形巴贝斯虫病的分子流行病学调查。

译名：

Development and application of real-time PCR for the detection of Babesia ovata in cattle

作者：

TIAN Wan-nian;XUE Shu-jiang;JIA Li-jun;ZHANG Shou-fa;College of Animal Science,Jilin Agricultural Science and Technology College;Key Lab oratory of Preventive Veterinary Medicine in Jilin Province;College of Agriculture,Yanbian University;

关键词：

Babesia ovata;;real-time PCR;;detection

摘要：

In order to develop a real-time PCR assay for the detection of Babesia ovata,a pair of specific primers was designed,which were based on the 18 S rRNA gene of Babesia ovata.In result,the developed PCR assay was specific for detecting Babesia ovata,but not for Theileria sergenti,Babesia bovis and Babesia bigemina.The sensitivity of the method was 1.26 copies/μL,which was 100 times more than conventional PCR.The coefficiency of variations was less than 3% for both intra-batch repeatability test and inter-batch repeatability test.Among 60 clinical samples,the positive rate was 41.67% detected by real-time PCR and 33.33% by conventional PCR.The results showed that the real-time PCR assay could be used for detection of Babesia ovata and molecular epidemiological investigation in cattle.

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