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Position: Home > Articles > 鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC的原核表达及抗原性分析 Journal of Henan Agricultural Sciences 2021 (3) 157-164

鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC的原核表达及抗原性分析

作  者:
荣娜;简思杰;孙薇;康超;陈琛;刘祥
单  位:
陕西理工大学生物科学与工程学院中德天然产物研究所
关键词:
嗜水气单胞菌;外膜蛋白TolC;原核表达;诱导条件;多克隆抗血清;抗原性;
摘  要:
探究鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC的免疫原性与抗原性,评价其免疫学功能,以期为嗜水气单胞菌亚单位疫苗的开发提供理论依据。采用生物信息学方法预测TolC蛋白的理化性质,分析其菌属间同源性与进化关系,构建TolC蛋白表达菌株并确定其最佳诱导表达条件,包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化TolC蛋白,免疫小鼠制备TolC抗血清,Western blot检测抗血清特异性与效价,免疫酶联法模拟TolC蛋白抗血清对不同鱼类致病菌的体外识别,探究TolC蛋白的抗原性。结果表明,TolC蛋白为孔道蛋白,在气单胞菌属间进化保守。成功表达、纯化了TolC蛋白,其最佳表达条件:菌液OD600为1.0、IPTG浓度0.1 mmol/L、37℃诱导8 h。Western blot结果表明,制备获得特异性TolC抗血清,效价达到1∶3 200;ELISA结果显示,TolC抗血清与嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、溶藻弧菌均存在识别作用。综上,嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC具有较好的免疫原性和抗原性,并可能对不同鱼类致病菌存在交叉免疫保护作用。

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