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核桃不同时期叶片及不同组织RNA提取方法筛选

作  者:
陈浩;安瑞云;常青山;王梓;毛星夜
单  位:
河南省洛阳市隋唐城遗址植物园;河南科技大学林学院
关键词:
核桃;总RNA;CTAB法;SDS法;Trizol法
摘  要:
[目的]针对核桃组织中富含多酚、多糖及黄酮类物质含量较高的特点,筛选经济高效、适合核桃不同发育时期叶片及不同组织总RNA的提取方法.[方法]以核桃幼嫩、成龄和衰老叶片为材料,分别采用改良硼砂-CTAB法、改良硼砂-CTAB-异丙醇法、改良SDS法、改良Trizol法Ⅱ以及试剂盒法进行总RNA的提取.以筛选与优化的改良硼砂-CTAB法、改良硼砂-CTAB-异丙醇法分别提取核桃胚、叶柄、韧皮部、雄花的总RNA,并对RNA产量、纯度、电泳图谱和RT-PCR进行分析.[结果]5种方法都可获得核桃总RNA,其中,改良硼砂-CTAB法能够从幼嫩叶片、成龄叶片、叶柄和雄花中获得质量高、完整性好的总RNA,28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,A260/A280介于1.9~2.1之间,A260/A230大于2.0,且总RNA质量浓度可达1 185.2 ng·μL-1;改良硼砂-CTAB-异丙醇法则适合衰老叶片、胚和韧皮部的提取,总RNA质量浓度可达1 019.0 ng·μL-1.通过RT-PCR在不同组织中均能扩增出核桃18S rRNA和翻译起始因子(JreIF1A)片段.[结论]改良硼砂-CTAB法和改良硼砂-CTAB-异丙醇法相比其他3种方法更易排除蛋白质、酚类等杂质干扰,对于不同时期不同组织均有更好的适用性,提取所获得的总RNA纯度和浓度完全符合后续的分子生物学试验要求.

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