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基于SYNJ2BP敲除的HEK293T细胞系研究SYNJ2BP对EIAV复制的影响

作  者:
王欣慧;段盈伊;陈克伟;王雪峰;那雷;杜承;王晓钧
单  位:
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
关键词:
CRISPR/Cas9;马传染性贫血病毒;SYNJ2BP;HEK293T
摘  要:
为分析突触小泡磷酸酶2结合蛋白(SYNJ2BP)对马传染性贫血病毒(EIAV)复制的影响,本研究设计了2条靶向SYNJ2BP基因外显子的特异性sgRNA,将sgRNA插入plenti-CRISPRv2GFP载体获得重组质粒pSYN-sgRNA1和pSYN-sgRNA2,将这2个重组质粒转染HEK293T细胞,通过流式细胞仪分选获得单克隆细胞株,测序结果显示SYNJ2BP基因产生插入突变,经western blot确认已敲除SYNJ2BP基因并稳定遗传,表明获得了SYNJ2BP敲除的HEK293T细胞系.将EIAV感染性克隆质粒CMV3-8分别转染SYNJ2BP敲除的HEK293T细胞系与野生型细胞,经western blot证实与野生型细胞相比敲除SYNJ2BP抑制了EIAV囊膜蛋白的表达,灰度值显示囊膜蛋白表达量降低50%.综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了SYNJ2BP敲除的HEK293T细胞系,并发现SYNJ2BP基因敲除后抑制了EIAV囊膜蛋白的表达,本研究为进一步分析SYNJ2BP调节EIAV复制的分子机制提供了参考依据.
译  名:
Construction of SYNJ2BP-knockout HEK293T cell line and its effect on there plication of equine infectious anemia virus

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