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MAVS-/-细胞系的构建及其影响禽流感病毒复制的研究

作者：

张子博;田璐;史鑫琪;郭慧娟;陈洪岩;王金泉;孟庆文

单位：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室;新疆农业大学动物医学学院

关键词：

MAVS;MDCK;CRISPR/Cas9;H9N2亚型禽流感病毒

摘要：

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株,对流感病毒的增殖特性进行初步研究.设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体,与pCAG-Cas9-EGFP表达载体共转染MDCK细胞,经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除细胞系,CCK-8法检测细胞增殖速度;荧光定量PCR方法检测H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染后的TCID50、病毒拷贝数以及IRF3、IFN-β、Mx1基因转录水平变化.结果显示,筛选出1株MAVS基因缺失44bp的MDCK细胞(MAVS-/-MDCK),其增殖速度与正常细胞相比未观察到显著差异;荧光定量PCR结果表明,TCID50、病毒拷贝数差异最高可分别达到MDCK细胞的4.11倍和1.82倍;MAVS-/-MDCK中IRF3、IFN-β和Mx1 mRNA表达水平显著降低,表明MAVS敲除后抑制了 Ⅰ型干扰素信号通路.表明,本研究获得的MAVS-/-MDCK能够促进禽流感病毒的复制,为提高疫苗生产效率和质量提供候选细胞株;该细胞株也为进一步研究MAVS参与抗病毒天然免疫应答奠定基础.

译名：

Construction of MAVS-/-cell line and its effect on avian influenza virus replication

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