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Position: Home > Articles > Cloning of whole ORF coding genes of FMDV and construction of recombinant adenoviral pAdTrack-CMV Chinese Veterinary Science 2006,36 (2) 93-97

FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒穿梭质粒的构建

作  者：
张兴旺;王勤;柳纪省;李志勇;王辉;殷相平;谢庆阁
单  位：
兰州大学生命科学学院;中国农业科学院兰州兽医研究所
关键词：
口蹄疫病毒;全开放阅读框;克隆;穿梭载体
摘  要：
为研制FMD复制缺陷型腺病毒活载体疫苗,通过RT-PCR方法获得了O型口蹄疫病毒(FMDV)全开放阅读框(ORF)基因片段,将其克隆到pMD18-T载体后测序,再将ORF编码基因定向克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒。经PCR、酶切及测序鉴定,所克隆的ORF编码基因序列与原始强毒株Akesu/58的ORF编码基因比较,L、P1、P2、P3基因的核苷酸同源性分别为98.8%、97.9%、99.0%和97.6%,PCR、酶切鉴定重组腺病毒穿梭质粒均获得了长约6.9 kb的目的基因片段。表明,成功获得了含有O型FMDV全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整FMDV开放阅读框架的编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒。
译  名：
Cloning of whole ORF coding genes of FMDV and construction of recombinant adenoviral pAdTrack-CMV
作  者：
ZHANG Xing-wang~(1,2,3),WANG Qin~(2),LIU Ji-xing~(1),LI Zhi-yong~(1),WANG Hui~(1),YIN Xiang-ping~(1),XIE Qing-ge~(1) (1.Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China;2.School of Life Science,Lanzhou University,Lanzhou 730000,China;3.Center of Clinical Laboratory,People's Hospital of Gansu Province,Lanzhou 730000,China)
关键词：
foot-and-mouth disease virus;open reading frame;cloning;pShuttle vector
摘  要：
In order to develop a recombinant adenoviral pAdTrack-CMV vaccine,genes of a whole ORF coding genes of foot-and-mouth disease virus(FMDV) were amplified by RT-PCR and inserted subsequently into a pMD18T vector and sequenced.The gene was cloned into the vector pAdTrack-CMV to construct the recombinant adenoviral pAdTract-CMV/ORF.The recombinant pAdTrack/ORF was identified by PCR,digestion with restriction endonucleases and sequencing.The sequencing results showed that the amplified L,P1,P2 and P3 gene's nucleotide sequences shared 98.8%,97.9%,99.0% and 97.6% homology with that of Akesu/58,respectively.PCR amplification and digestion with XbaⅠ+NotⅠ confirmed that the recombinant adenoviral pAdTrack-CMV contained the target genes of 6.9kb.The results showed that the recombinant pAdTrack/ORF containing the whole ORF gene of O type FMDV was constructed successfully.

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