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家蚕G4结合蛋白BmLARK的重组表达和结晶

作  者:
叶若琦;牛康康;韩书婧;汪颖;李琼;周丛照;冯启理
单  位:
广东省昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广州市昆虫发育与应用重点实验室华南师范大学生命科学学院昆虫科学与技术研究所;中国科学技术大学生命科学学院结构生物化学实验室
关键词:
家蚕;G-四链体;转录因子;BmLARK;晶体;
摘  要:
细胞内DNA通常以B型右手双螺旋结构的形式存在。但当一段DNA富含连续出现的鸟嘌呤(G)时,这段DNA序列有可能折叠为四链体(G-quadruplex, G4)结构。G4结构广泛分布于生物的基因组中,参与基因的转录调控、DNA复制、端粒保护和蛋白质翻译等重要的生物学过程。我们前期在家蚕转录因子BmPOUM2基因的启动子区鉴定到一个G4结构,并筛选到一个与该结构特异结合的蛋白BmLARK。在本研究中,为了分析BmLARK与G4结构结合的分子机制,我们首先对编码BmLARK全长及其多个截短的DNA序列进行了分子克隆,利用原核表达系统对BmLARK和截短蛋白进行了重组表达和纯化,获得的重组蛋白在体外可与BmPOUM2-G4结构结合;然后运用悬滴蒸汽扩散法对该蛋白质-DNA结合复合物进行结晶,初步获得了晶体。试验结果为进一步探索获得和解析BmLARK-G4复合物的晶体结构提供了线索。

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