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当前位置: 首页 > 文章 > 基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp1基因敲入小鼠 中国畜牧兽医 2023 (11) 4392-4402
Position: Home > Articles > 基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp1基因敲入小鼠 China Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2023 (11) 4392-4402

基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp1基因敲入小鼠

作  者：
沙芳芳;范沛;杨培长;张璐;李建科
单  位：
河南工业大学生物工程学院;中国农业科学院蜜蜂研究所
关键词：
CRISPR/Cas9;小鼠;基因敲入;蜂王浆主蛋白1;血压调节
摘  要：
【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1（MRJP1）基因敲入血管平滑肌细胞后，在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术，将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵，制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp1基因定点敲入小鼠，并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵，持续将血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导野生型（WT）和纯合子(Mrjp1+/+)小鼠，比较不同时间收缩压和舒张压，以及胸主动脉中膜面积/管腔面积（Media/Lumen area）比值的差异。【结果】F0代嵌合体小鼠与野生型交配，产生杂合子(Mrjp1+/-)小鼠，对Mrjp1+/-小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示，Mrjp1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp1+/-小鼠之间交配产生WT、Mrjp1+/-和Mrjp1+/+小鼠，Mrjp1基因在胸主动脉中能够顺利转录和翻译。持续给予AngⅡ,Mrjp1+/+小鼠收缩压和舒张压升高趋势整体低于WT小鼠，收缩压在第3、6、9、12天差异显著（P＜0.05）,舒张压在第3（P＜0.05）、6（P＜0.01）天差异显著；经AngⅡ刺激后，Mrjp1+/+小鼠胸主动脉Media/Lumen area比值亦显著低于WT小鼠（P＜0.05）。【结论】Mrjp1基因特异性敲入小鼠血管平滑肌细胞，可在体内水平上抑制AngⅡ诱导的高血压，为深入了解MRJP1蛋白功能及精准开发蜂王浆提供了重要的理论依据。

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