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Position: Home > Articles > DNA methylation affects wing development of Bombyx mori through regulating autophagy Acta Entomologica Sinica 2022,65 (2) 119-129

DNA甲基化通过调控细胞自噬影响家蚕翅的发育

作  者:
龚程程;吕浩;郑思春;徐关峰
单  位:
华南师范大学生命科学学院
关键词:
家蚕;DNA甲基化;翅;细胞自噬;发育调控
摘  要:
[目的]本研究旨在探索DNA甲基化是否通过调控细胞自噬进而影响家蚕Bombyx mori翅的发育.[方法]分别用1和2 μg DNA甲基化特异性抑制剂5-aza-dC处理家蚕卵巢Bm12细胞和家蚕预蛹,荧光显微镜下观察Bm12细胞的数量,利用dot blot检测Bm12细胞中DNA甲基化水平,利用溶酶体染色检测细胞自噬强度;利用RT-qPCR检测细胞自噬相关蛋白(Agt)基因的表达水平;利用Western blot和免疫组化定性检测Bm12细胞中自噬标记物LC3蛋白的分型情况;观察成虫的翅表型并计算残翅率和翅面积.用2 μg细胞自噬激活剂SMER28处理家蚕预蛹,以及采用自噬抑制剂Spautin-1(2μg)挽救5-aza-dC(2μg)处理后的家蚕预蛹,利用溶酶体染色检测翅细胞内自噬强度,观察翅表型并计算残翅率和翅面积.[结果]1 μg 5-aza-dC处理后12,24和48 h抑制了 Bm12细胞的生长,使Bm12细胞甲基化水平降低,Bm12细胞自噬水平升高;处理后48 h Bm12细胞中Atg基因表达上调.家蚕预蛹期注射2μg5-aza-dC后24,48和72 h,成虫翅细胞内自噬水平升高,Atg基因的表达上调,出现大量畸形翅并且残翅率升高72.62%和翅表面积减少66%.家蚕预蛹期注射2μg SMER28 24,48和72 h后,成虫翅细胞内自噬水平升高,成虫出现大量畸形翅,残翅率升高75.13%和翅表面积减少48.79%.利用Spautin-1对5-aza-dC处理的预蛹进行挽救实验,结果显示细胞自噬抑制可以缓解DNA去甲基化对成虫翅发育的影响.[结论]本研究结果证明DNA甲基化通过调节细胞自噬在家蚕翅发育中发挥作用.本研究结果为DNA甲基化调控昆虫发育提供了实验依据.
译  名:
DNA methylation affects wing development of Bombyx mori through regulating autophagy

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