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Position: Home > Articles > Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Rare and Endangered Plant Parrotia subaequalis Journal of Anhui Agricultural Sciences 2018 (11) 81-83

珍稀濒危植物银缕梅ISSR-PCR反应体系建立及优化

作  者：
陈云霞;路志远;肖卓恒
单  位：
南京森林警察学院
关键词：
银缕梅;ISSR;PCR反应体系;资源保护
摘  要：
[目的]建立和优化银缕梅ISSR-PCR反应体系。[方法]采用正交试验和单因子试验对影响PCR扩增体系中的Mg~(2+)浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶用量5个因子进行分析研究。[结果]银缕梅ISSR-PCR 25μL反应体系中5个因子最优水平:DNA模板(20 ng/μL)2.50μL,引物(10μmol/L)1.00μL,Taq酶(5 U/μL)0.10μL,Mg~(2+)(25 mmol/L)3.00μL,d NTPs(2.5 mmol/L)1.50μL。[结论]银缕梅ISSR-PCR反应最优体系的建立为进一步利用ISSR对其进行分子标记辅助育种、分子指纹图谱构建和遗传多样性分析等后续研究奠定了基础。
译  名：
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Rare and Endangered Plant Parrotia subaequalis
作  者：
CHEN Yun-xia;LU Zhi-yuan;XIAO Zhuo-heng;Nanjing Forest Police College;
关键词：
Parrotia subaequalis;;ISSR;;PCR reaction system;;Resources protection
摘  要：
[Objective]To establish and optimize ISSR-PCR reaction system.[Method]Effect for ISSR-PCR reaction of Parrotia subaequalis on 5 factors( Mg~(2+),dNTPs,DNA template,Taq polymerase and primer) were analyzed by orthogonal design and single factor test.[Result]The optimal ISSR-PCR reaction system( 25 μL) mixture contained DNA template( 20 ng/μL) 2. 50 μL,primer( 10 μmol/L) 1. 00 μL,Taq polymerase( 5 U/μL) 0. 10 μL,Mg~(2+)( 25 mmol/L) 3. 00 μL,d NTPs( 2. 5 mmol/L) 1. 50 μL.[Conclusion]The establishment of ISSR-PCR reaction system for P. subaequalis laid the foundation for the further use of ISSR to study molecular marker-assisted breeding,molecular identity and genetic diversity.

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