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Position: Home > Articles > In vitro transcription system based on Nib of Wheat yellow mosaic virus Acta Phytopathologica Sinica 2019 (2) 212-218

小麦黄花叶病毒Nib蛋白介导的体外转录体系的创建

作  者：
耿国伟;于成明;李向东;原雪峰
单  位：
山东农业大学植物保护学院植物病理学系山东省农业微生物重点实验室
关键词：
小麦黄花叶病毒;体外转录;Nib蛋白;RNA依赖的RNA聚合酶
摘  要：
本研究是利用异源表达的小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)复制酶Nib蛋白创建了病毒核酸的体外复制系统。将WYMV的Nib编码序列扩增并插入到大肠杆菌表达载体p MAL-C2X中以构建原核表达质粒p MAL-WYNib。0.4 mmol·L~(-1)IPTG诱导可特异性表达分子量约为100 k Da的M BP-Nib融合蛋白。根据温度梯度测定,20℃下诱导M BP-Nib的可溶性比例较高,约为30%,可满足M BP标签的亲和层析。通过与WYM V的其他蛋白和烟草丛顶病毒的RdRp进行比较,纯化的M BP-Nib融合蛋白可以特异性识别WYM V RNA1和RNA2的3'末端区域并体外合成其互补链,此体外转录体系可用于WYMV复制调控的研究。
译  名：
In vitro transcription system based on Nib of Wheat yellow mosaic virus
作  者：
GENG Guo-wei;YU Cheng-ming;LI Xiang-dong;YUAN Xue-feng;Department of Plant Pathology,College of Plant Protection,Shandong Agricultural University,Shandong Province Key Laboratory of Agricultural Microbiology;
关键词：
Wheat yellow mosaic virus;;in vitro transcription;;Nib;;RNA-dependent RNA polymerase
摘  要：
In this study,we developed an in vitro transcription system based on Nib (RdRp) of Wheat yellow mosaic virus (WYMV). Nib coding sequence of WYMV was amplified and inserted into the prokaryotic expression vector p MAL-C2X to construct the plasmid p MAL-WY-Nib. MBP-Nib fused protein (100 k Da) was expressed with the induction of 0.4 mmol·L~(-1) IPTG. Based on the differential temperature experiment,it is suggested that 20℃ is the optimal temperature for MBP-Nib expression. The soluble ratio of MBP-Nib is about 30%,which is sufficient for MBP-tag isolation using affinity chromatography. As compared with other proteins of WYMV and viral RdRp of Tobacco bushy top virus,the purified MBP-Nib can specifically recognize the 3'-terminal region of WYMV RNA1 and RNA2 and synthesize complementary strand in vitro. This Nib-based in vitro transcription system will facilitate the study on regulation of WYMV replication.

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