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海藻酸钙固定化重组暗紫贝母PAL蛋白

作  者:
李响;童婧莹;张鑫薇;刘玢;秦余;唐婕;苗祖源;许天成;廖海;周嘉裕
单  位:
西南交通大学生命科学与工程学院;
关键词:
海藻酸钙;暗紫贝母PAL蛋白;暗紫贝母PAL重组酶;固定化;苯丙酮尿症
摘  要:
利用IPTG诱导含暗紫贝母(Fritillaria unibracteata)苯丙氨酸解氨酶FuPAL-pET28a的重组大肠杆菌BL21菌株,经Ni2+亲和层析与质谱鉴定获得纯度较高的FuPAL重组蛋白.以海藻酸钙凝胶为固定化介质,包埋FuPAL重组蛋白.单因素考察试验与统计学分析结果表明,海藻酸钠质量分数、CaCl2浓度、固定化时间、海藻酸钠与酶质量比影响固定化酶的活性,它们的最优条件分别为3.5%、1g/L、4 h与40 000:1.进一步采用L9(3~4)正交试验设计,确定影响因素的重要性从高到低依次为CaCl2浓度、海藻酸钠质量分数、固定化时间、海藻酸钠与酶质量比,最佳的固定化条件是CaCl2浓度为2 g/L,海藻酸钠质量分数为4%,固定化时间为3 h,海藻酸钠与酶质量比为40 000:1.在该优化工艺条件下,制备的固定化酶凝胶颗粒呈较好的圆整性和均一性,相对酶活力达到最高,为68.53%.该固定化方法具有试验成本低、工艺流程简单、反应条件温和的特点,应用前景较好,并为固定化FuPAL蛋白的制备优化提供了重要的理论基础.

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