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Position: Home > Articles > Optimization of experiment conditions with ISSR-PCR reaction system in Anemone obtusiloba Pratacultural Science 2012,29 (1) 65-70

钝裂银莲花ISSR-PCR反应体系优化

作  者：
孙涛;刘左军;孙文斌;刘凤梅;李冰
单  位：
兰州理工大学生命科学与工程学院
关键词：
钝裂银莲花;ISSR-PCR;反应体系;正交优化
摘  要：
本研究以改良的CTAB法提取的甘肃合作钝裂银莲花(Anemone obtusiloba)基因组DNA为模板,通过正交和单因素试验,探讨引物浓度、聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度和模板浓度对银莲花ISSR-PCR扩增的影响。结果表明,钝裂银莲花ISSR-PCR最佳反应体系:总体积20μL,模板浓度20ng,聚合酶2 U,Mg2+浓度2.5mmol·L-1,dNTPs浓度0.3mmol·L-1,引物浓度0.4mmol·L-1,引物UBC807退火温度为51℃。
译  名：
Optimization of experiment conditions with ISSR-PCR reaction system in Anemone obtusiloba
作  者：
SUN Tao,LIU Zuo-jun,SUN Wen-bin,LIU Feng-mei,LI Bing(School of Life Science and Engineering,Lanzhou University of Science and Technology,Lanzhou 730050,China)
关键词：
Anemone obtusiloba;ISSR-PCR;amplification system;orthogonal optimization
摘  要：
The genome DNA extracted by the improved method of CTAB from Anemone obtusiloba collected from Hezuo region in Gansu was used as mode to optimize the ISSR reaction conditions by orthogonal experiment and single factor experiment.This study showed that the optimal conditions of ISSR reaction for A.obtusiloba were 20 μL reaction system,and it contained 10× Buffer 2 μL,Mg2+ 2.5 mmol·L-1,Taq enzyme 2 U,Genome DNA 2 mg·L-1,dNTPs 0.3 mmol·L-1 and ISSR primer 0.4 mmol·L-1.The process of PCR were 94 ℃ for 5 min,35 cycles(94 ℃ 30 s,51 ℃ 45 s,72 ℃ 90 s),and 72 ℃ for 7 min,and the consult based on primer UBC 807.

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