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基于绵羊肺炎支原体Enolase蛋白建立间接ELISA抗体检测方法

作  者:
张梦洁;王佳婧;何苗锋;刘润春;恽佳蕾;李文良;毛立;张纹纹;孙敏;程子龙;杨蕾蕾;储岳峰;赵茹茜;刘茂军
单  位:
南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室;中国农业科学院兰州兽医研究所
关键词:
绵羊肺炎支原体;Enolase蛋白;原核表达;间接ELISA;
摘  要:
旨在建立一种检测绵羊肺炎支原体(Mo)血清抗体的间接ELISA方法,笔者构建了Mo Enolase基因原核表达载体,诱导表达后,纯化的重组蛋白用Western-blot分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立了Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,重组蛋白得到可溶性表达,Western-blot证实具有良好的反应原性。间接ELISA反应条件优化结果显示,包被抗原浓度为2 mg/L,37℃2 h,封闭条件为含10 g/L BSA的PBS,4℃过夜,待检血清稀释度为1∶50,37℃1 h,酶标二抗最佳稀释度为1∶4 000,37℃1 h,底物最佳显色条件为37℃避光10 min。分别利用38份阴性血清、38份阳性血清确定临界值为S/P=0.365。用该方法与间接血凝法对180份血清进行检测,两者符合率为81.11%。结果表明,本研究建立的间接ELISA方法敏感、特异,具有良好的临床应用前景。

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