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霍乱弧菌荧光RAA快速检测方法的建立和应用

作  者:
郭晨瑶;梁莹;胡同静;申进玲;杨捷琳;薛峰;张弛;蒋原;汤芳;戴建君
单  位:
南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室  ;江苏苏测检测认证有限公司;上海海关动植物与食品检验检疫技术中心;江苏省南京市产品质量监督检验院;南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室
关键词:
水产品;霍乱弧菌;快速检测;重组酶介导的等温扩增;食品基质;
摘  要:
为了建立一种快速检测霍乱弧菌的方法,试验采用重组酶介导的等温扩增(Recombinase-aided amplification, RAA)方法对霍乱弧菌进行检测,并进行了特异性试验、灵敏度试验、模拟样品12 h增菌培养前后的检测、100份水产品的实际检测。结果表明:副溶血性弧菌、创伤弧菌等12株非霍乱弧菌的标准菌株DNA扩增结果为阴性;对霍乱弧菌分离株的检测限为6.7×102 cfu/mL;增菌培养前,模拟样品中的霍乱弧菌最低检测限为6.7×102 cfu/mL,增菌培养12 h后最低检测限为6.7×10-2 cfu/mL;荧光RAA方法与细菌分离划线方法对100份水产品的检测结果一致,30 min即可得到检测结果且仪器便携度高。说明试验建立的荧光RAA方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,适用于现场大批量样品检测。

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