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Position: Home > Articles > 红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响 Chinese Agricultural Science Bulletin 2023 (12) 93-98

红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响

作  者:
王娇;桂艳玲;韩洁;赵杰宏
单  位:
贵州中医药大学药学院
关键词:
紫色红曲霉;orf5基因;农杆菌介导遗传转化(ATMT);限制性内切酶介导基因整合(REMI);洛伐他汀
摘  要:
为研究红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响,丰富洛伐他汀代谢调控机制。用ATMT和REMI法将gus-orf5融合基因转化红曲霉,并对ATMT法的共培养条件和REMI法的内切酶进行优化筛选,对获得的潮霉素抗性菌株进行GUS染色和PCR鉴定,并检测阳性菌株的洛伐他汀含量变化。结果筛选出20μg/mL潮霉素的培养基作为转基因红曲霉的抗性筛选浓度,补充1/10 LB的Co-IM共培养基有利于ATMT法转化,在REMI法中Xba I介导的转化效果较好。用ATMT和REMI法均获得抗性菌落,经PCR检测表明orf5和hyg基因均已导入红曲霉,GUS染色呈蓝色。过表达菌株的洛伐他汀含量比对照明显提高,高达36.89%。红曲霉过表达orf5有利于增加洛伐他汀的积累,为深入研究红曲霉orf5基因的功能提供参考。

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