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Position: Home > Articles > Optimization for ISSR-PCR System of Rhododendron mucronulatum Hubei Agricultural Sciences 2010,49 (11) 42-44

迎红杜鹃ISSR-PCR反应体系建立

作者：

张艳红;沈向群;刘旭颖;赵凤军

单位：

沈阳农业大学园艺学院;辽东学院

关键词：

迎红杜鹃;正交设计;简单重复序列区间-多聚酶链式反应体系

摘要：

利用正交设计L16(45)方法对迎红杜鹃(Rhododendron mucronulatum Turcz.)ISSR-PCR(Inter-simple sequence repeat-Polymerase chain reaction products)反应体系的5因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、DNA模板、dNTP、引物)在4个水平上进行了优化试验。结果表明,ISSR-PCR反应体系各因素在设定的不同水平对PCR反应结果都有影响,其中引物浓度的影响最大;筛选出了各反应因素的最佳水平,建立的迎红杜鹃ISSR-PCR反应最佳体系(25μL)为2.0μL10×Buffer、0.3μL Taq DNA聚合酶(5U/μL)、2μLDNA模板(20ng/μL),2.5μL dNTPs(2.5mmol/L)、2μL引物(10μmol/L)。

译名：

Optimization for ISSR-PCR System of Rhododendron mucronulatum

作者：

ZHANG Yan-hong1,2,SHEN Xiang-qun2,LIU Xu-ying2,ZHAO Feng-jun1(1.Liaodong University,Dandong 118003,Liaoning,China;2.College of Horticulture,Shenyang Agricultural University,Shenyang 100161,China)

关键词：

Rhododendron mucronulatum Turcz.;orthogonal design;Inter-simple sequence repeat-Polymerase chain reaction products system

摘要：

The orthogonal design was used to optimize Rhododendron mucronulatum Turcz.'s ISSR-PCR(Inter-simple sequence repeat-Polymerase chain reaction products) amplification system's five factors(Taq DNA polymerase,Mg2+,DNA template,dNTP,and primer) in four levels respectively.The results showed that,the affections of each factor in different levels were found,and concentrations of primer was the most effective factor to the result of PCR,a most suitable ISSR-PCR system for R.mucronulatum was established,it's 25 μL reaction system which contained 2.0 μL 10×Buffer,0.3 μL Taq DNA polymerase(5 U/μL),2 μL DNA template(20ng/μL),2.5 μL dNTPs(2.5 mmol/L),and 2 μL primer(10 μmol/L).

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