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Position: Home > Articles > Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化 Chinese Agricultural Science Bulletin 2021 (17) 19-25

Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化

作  者：
王海燕;陈新;周新成;沈旭;孔华;王文泉
单  位：
南京农业大学生命科学学院;海南大学热带作物学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所
关键词：
丙酮酸磷酸双激酶;表达谱;RNA干扰;表达载体;木薯;遗传转化;脆性愈伤;转基因苗;PCR鉴定;
摘  要：
本研究为了明确丙酮酸磷酸双激酶（ppdk）在木薯中的表达谱,创制Mechlppdk的干扰株系,以期为Mechlppdk的功能研究提供材料。本研究以栽培型木薯Arg7为材料,用qPCR的方法分析Mechlppdk在木薯根、茎、叶中的表达谱;采用RNA干扰的方法,构建Mechlppdk的干扰载体,并遗传转化木薯脆性愈伤,经木薯再生体系获得转基因苗,在添加抗生素的培养基上进行生根筛选,经PCR鉴定获得Mechlppdk的干扰株系。用qPCR的方法鉴定Mechlppdk在干扰株系的表达情况。结果表明,Mechlppdk在木薯叶片中表达量最高,达到管家基因的50%。在Mechlppdk的转运肽区,选取1个保守区段设计引物,构建RNA干扰表达载体pART27-Mechlppdki,将表达载体转化农杆菌LBA4404,侵染木薯脆性胚愈伤,获得阳性转基因木薯苗7个株系。通过qPCR分析发现各株系Mechlppdk转录本有不同程度的降低。通过以上分析表明本研究获得了干扰效率较高木薯Mechlppdk干扰株系,将为解析木薯Mechlppdk的功能提供研究材料。

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