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纹皮蝇Hypodermin C基因原核表达及间接ELISA检测方法的建立

作  者:
王文龙;刘春霞;阮风雷;呼和巴特尔
单  位:
内蒙古农业大学兽医学院;内蒙古农业大学生命科学学院
关键词:
纹皮蝇;Hypodermin C;原核表达;间接ELISA
摘  要:
为建立牛皮蝇蛆病的抗体检测方法,本研究从纹皮蝇Ⅰ期幼虫中提取总RNA,采用RT-PCR扩增了Hypodermin C(HC)基因。将该基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中进行原核表达。获得了31 ku以包涵体形式表达的重组HC蛋白。Western blot结果表明表达产物能够与阳性牛血清IgG特异性结合,具有良好的抗原活性。以纯化的重组HC作为包被抗原建立了牛皮蝇蛆病间接ELISA诊断方法,实验确定抗原最佳包被浓度为15.63μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,阳性标准判定为待检血清OD值>0.256。所建立的诊断方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性。应用该检测方法对230份临床血清进行检测,阳性率为20.6%。研究结果表明该间接ELISA方法是一种有效的牛皮蝇蛆病血清学检测方法。
译  名:
Prokaryotic expression of Hypodermin C gene of Hypoderma lineatum and establishment of indirect ELISA

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