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检测猪圆环病毒4型实时荧光PCR方法的建立及应用

作  者:
张倩;王金凤;刘立兵;付琦;袁万哲;赵款;马宏伟;马增军;王建昌;韩庆安
单  位:
河北农业大学动物医学学院;石家庄海关技术中心;河北科技师范学院动物科技学院;河北省动物疫病预防控制中心
关键词:
猪圆环病毒4型;ORF2基因;实时荧光PCR;
摘  要:
参照GenBank收录的PCV4 ORF2基因保守序列,设计合成了1对特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应体系,建立了针对PCV4的实时荧光PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示,该方法的Ct值与标准品在1.53×103~1.53×107拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,R2值为0.999;特异性强,仅对PCV4呈特异性扩增,与PCV1、PCV2、PCV3以及其他多种猪常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为1.53×101拷贝/μL反应;重复性好,组内、组间变异系数均小于2%。使用该方法对采集自2013—2020年间河北省10个地区不同养殖场和屠宰场的868份猪组织样本进行PCV4检测,结果表明PCV4的阳性检出率为1.27%(11/868)。ORF2基因测序分析表明,河北省分离株同国内其他分离株的ORF2同源性为98.4%~99.6%。本研究建立的实时荧光PCR方法对PCV4的病原学监测和流行病学调查具有重要意义。

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