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SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法检测2型猪圆环病毒

作者：

潘群兴;何孔旺;黄克和

单位：

江苏省农业科学院兽医研究所

关键词：

2型猪圆环病毒;实时荧光定量PCR;标准曲线

摘要：

利用PCR技术扩增出2型猪圆环病毒(PCV)ORF2保守区基因107bp片段,并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR,并绘制标准曲线.再以提取的PCV-2、PCV-1、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR检测.结果表明:建立的实时定量PCR方法,起始模板浓度与样本阈值循环数(G)值之间呈很好的线性关系,标准曲线斜率为-0.32,相关系数r^2为0.997,G值为11.9~26.9.PCV-2能扩出S型荧光曲线,熔解曲线的峰狭窄单一,而PCV-1、PPV和PRV均不能扩出.对32份健康猪和32份断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)可疑猪样品定量检测:健康猪阳性率为44％(14/32),病毒载量均小于10^4拷贝·μL^-1;PMWS可疑猪阳性率96.8％(31/32),病毒载量均大于10^5拷贝·μL^-1.实时荧光定量PCR方法可用于2型猪圆环病毒定性及定量的检测.

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