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产单核细胞李斯特菌溶血素O基因在大肠杆菌中的优化表达及ELISA检测方法的建立

作者：

赵松波;孙晓林;张少华;周邦信;窦永喜;骆学农

单位：

甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

关键词：

产单核细胞李斯特菌;李斯特菌溶血素O;优化表达;纯化;酶联免疫吸附试验

摘要：

在克隆产单核细胞李斯特菌(LMO)hlyA基因并构建其原核表达载体的基础上,进一步对IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等影响目的蛋白表达的重要条件进行了优化。根据确定的最佳诱导条件,使目的蛋白获得了高效表达。对表达的李斯特菌溶血素O(LLO)进行了纯化,以其作为靶抗原,采用间接ELISA方法检测了动物血清中的特异性LLO抗体。结果表明,用表达产物作为靶抗原可对LMO感染动物进行初步诊断,为建立基于LLO的动物李斯特菌病血清学诊断技术奠定了基础。

译名：

Optimized expression of listeriolysin O(LLO) gene in Escherichia coli and development of an ELISA for detection of anti-LLO antibody

作者：

ZHAO Song-bo1,2,SUN Xiao-lin2,ZHANG Shao-hua1,ZHOU Bang-xin1,2,DOU Yong-xi1,LUO Xue-nong1(1.Key Laboratory of Animal Parasitology of Gansu Province/Key Laboratory of Veterinary Public Health of the Ministry of Agriculture/State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology/Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China;2.College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China)

关键词：

Listeria monocytogenes;listeriolysin O(LLO);optimized expression;purification;ELISA

摘要：

Based on the cloning and expression of Listeria monocytogenes(LMO) hlyA gene,the concentration of IPTG,inducing time and temperature,all influence the target protein expression level,were optimized respectively.According to the optimal conditions,the target protein was highly expressed.With the purified recombinant listeriolysin O(LLO) protein as target antigen in an indirect ELISA,the animals infected with LMO could be identified by detecting the serum's specific antibody.The results showed that the purified-expressed LLO provided foundation for developing serological technology for diagnosis of animal listeriosis.

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