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BpERF1.1基因在低温下的表达特性及过表达载体构建

作  者:
孟醒;林昕;樊晓亮;钱庆;杨欣欣;黄海娇
单  位:
河北雾灵山国家级自然保护区管理中心;东北林业大学
关键词:
白桦;BpERF1.1;低温胁迫;
摘  要:
分析白桦BpERF1.1基因不同组织部位以及低温胁迫后的表达模式,定位基因表达部位,并为获得转基因白桦做初步准备。通过实时荧光定量PRC技术测定BpERF1.1基因的相对表达量;利用基因枪法在洋葱表皮细胞瞬时表达35S::BpERF1.1-GFP,激光共聚焦显微镜观察GFP发光情况,获得BpERF1.1基因表达产物的亚细胞定位信息;此外,利用双酶切法将BpERF1.1基因连接到pRokⅡ过表达载体,以及热激法转化到大肠杆菌感受态细胞中。BpERF1.1基因在叶片中相对表达量最高;低温胁迫后的24 h内,白桦BpERF1.1基因持续上调表达;BpERF1.1基因的表达产物定位在细胞核;pRokⅡ-BpERF1.1植物过表达载体菌液PCR的目的条带位置正确,测序结果 BLAST比对后与序列吻合。白桦BpERF1.1基因主要表达部位在叶片,其可以响应低温逆境,且过表达载体pRokⅡ-BpERF1.1构建成功。

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