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弓形虫VEG株ROP16蛋白对THP-1细胞免疫调节及机制研究

作  者:
陈梅;贾伟;杨峥;党甜甜;潘亚菲;苏雅静;杨宁爱;赵志军
单  位:
宁夏临床病原微生物重点实验室;宁夏医科大学临床医学院
关键词:
刚地弓形虫;ROP16蛋白;THP-1细胞;炎性小体;STAT3
摘  要:
为了探究弓形虫VEG株ROP16蛋白在THP-1细胞中的表达及对其免疫反应的影响和相关机制,本研究利用慢病毒构建过表达ROP16(overEep-ROP16)载体,空载体(overEep-NC)为对照,通过转染THP-1细胞构建稳转细胞株,对其荧光蛋白表达情况、ROP16在THP-1细胞中的表达及定位进行检测;通过 RT-PCR 检测炎性因子 IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-10、IL-12 mRNA 相对表达水平;Western-blot 方法检测炎性小体NLRP3、Caspase-1蛋白与信号通路蛋白STAT3、pTyr705-STAT3的表达水平.结果显示,构建的过表达ROP16重组慢病毒转染THP-1细胞后可观察到强绿色荧光,在THP-1细胞中rop16基因在mRNA与蛋白水平均成功表达且该蛋白定位于THP-1细胞核;与对照组相比,过表达组促炎细胞因子IL-1β、IL-18、TNF-α mRNA表达水平上调(P<0.01),而IL-12 mRNA下调(P<0.01),抗炎细胞因子IL-10mRNA上调(P<0.01),炎性小体NLRP3、Caspase-1蛋白与信号通路蛋白pTyr705-STAT3相对表达量上调(P<0.01),STAT3无显著变化(P>0.05).上述结果表明,构建的过表达ROP16重组慢病毒稳转染至THP-1细胞内并表达蛋白,表达的蛋白定位于THP-1细胞核内,该蛋白能激活NLRP3炎性小体促发炎症的发生并通过磷酸化STAT3 Tyr705调控抗炎作用.
译  名:
Study on immunomodulation of ROP16 protein from VEG strain of Toxoplasma gondii on THP-1 cells and its mechanism

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