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当前位置: 首页 > 文章 > 牛白血病病毒GP51蛋白在大肠杆菌中表达及胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立 中国预防兽医学报 2010,32 (4) 272-275
Position: Home > Articles > Expression of bovine leukemia virus GP51 protein in E.coli and development of colloidal gold immunochromatographic diagnosis strips for detection of antibody against the virus Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine 2010,32 (4) 272-275

牛白血病病毒GP51蛋白在大肠杆菌中表达及胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立

作  者：
宋阳威;张鑫宇;张常印;吴亚力;孙怀昌;唐泰山;张敬友
单  位：
江苏出入境检验检疫局;徐州出入境检验检疫局;扬州大学
关键词：
牛白血病病毒;gp51蛋白;表达;胶体金;免疫层析法
摘  要：
为了建立一种快速诊断牛白血病(BLV)的检测方法,本研究从BLV中扩增出其囊膜糖蛋白gp51基因,经测序后克隆于表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-gp51。将其转化受体菌BL21,用IPTG诱导后表达出约42ku的目的蛋白,经western blot检测表明目的蛋白具良好的反应原性。以胶体金标记的羊抗牛IgG(Fc)抗体作为标记抗体,将纯化的His-gp51重组蛋白和羊抗牛IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,各部件按序装配形成快速诊断试纸条。对22份样本分别用试纸条和ELISA试验进行检测,2种方法的阳性符合率为88.9%(8/9),表明本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快捷,具有较好的特异性和一定的敏感性,适宜基层初筛诊断和现场应用。
译  名：
Expression of bovine leukemia virus GP51 protein in E.coli and development of colloidal gold immunochromatographic diagnosis strips for detection of antibody against the virus
作  者：
SONG Yang-wei1,ZHANG Xin-yu2,ZHANG Chang-yin3,WU Ya-li1,SUN Huai-chang2,TANG Tai-shan3,ZHANG Jing-you3(1. Xuzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Xuzhou 221006,China;2. College of Veterinary Medicine,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China;3. Jiangsu Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Nanjing 210001,China)
关键词：
bovine leukaemia virus;gp51 protein;expression;colloid gold;immunochromatographic assay
摘  要：
The gp51 gene of BLV was amplified from the bovine leukaemia virus(BLV) ,cloned into the expression vector pET32a(+) ,and expressed in E.coli BL21 cells. The recombinant protein was detected by western blot and showed similar immuno-reactiongenicity to native GP51. A rapid gold immumochromatographic(GICA) strip was assembled by spraying the purified recombinant protein on the nitrocellulose membrane as the test line(T line) ,and the Gold-conjugated goat anti-bovine IgG as the control line(C line) . Test on a total of 22 field samples showed that the GICA assay and ELISA had a positive coincidence rate of 88.9 %(8/9) ,and a negative coincidence rate of 84.62 %(11/13) . The GICA established in this study is simple,rapid,sensitive and specific,which could be easily applieded in the field.

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