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当前位置: 首页 > 文章 > 正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究 中国草地学报 2006,28 (6) 52-55+102
Position: Home > Articles > Optimization of ISSR-PCR System on Puccinellia tenuiflora by Orthongonal Design Chinese Journal of Grassland 2006,28 (6) 52-55+102

正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究

作  者：
沙伟;滕兆岩;倪红伟
单  位：
黑龙江省科学院自然资源研究所;齐齐哈尔大学生命科学与工程学院
关键词：
星星草;ISSR;正交设计;PCR反应;体系优化
摘  要：
采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR反应体系的最佳方案为:PCR扩增程序,94℃预变性5min;进行40个循环的94℃变性45s,55℃复性45 s,72℃延伸2 min;72℃延伸10 min,4℃保存。20μl反应体系包括10%buffer 2μl、模板DNA60ng、dNTP 100μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.8mmol/L、Mg2+2.0mmol/L。
译  名：
Optimization of ISSR-PCR System on Puccinellia tenuiflora by Orthongonal Design
作  者：
SHA Wei~1,TENG Zhao-yan~1,NI Hong-wei~2(1.College of Life Science and Engineering,Qiqihaer University,Qiqihaer 161006,China2.Institute of Natural Resources,Academy of Sciences of Heilongjiang,Haerbin 150000,China)
关键词：
Puccinellia tenuiflora;ISSR;Orthongonal design;PCR reaction;Optimization of system
摘  要：
The methed of Orthongonal Design was used to optimize ISSR System in Puccinellia tenuiflora.The factors which affect the ISSR-PCR,such as the concentration of primer,the volume of Taq DNA polymerase,Mg~(2+)and dNTP concentrations were compared.At the same time,the concentration of template DNA,annealing temperature and cycle times of PCR procedure were selected too.The result showed that the suitable PCR procedure were one cycle denaturing at 94℃ for 5 min;40 cycles each involved denaturing at 94℃for 45s,annealing at 55℃for 45s,extending at 72℃for 2min;one cycle extending at 72℃ for 10 min,and then remaining at 4℃.In a total volume of 20μl ISSR-PCR system,it contains 10% buffer 2μl,100μmol/L dNTP,0.8mmol/L primer,2.0mmol/L Mg~(2+),1.5U TaqDNA polymerase and 60 ng template DNA.All of these are established as the foundation of building ISSR physical illustrative plates in Puccinellia tenuiflora.

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