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Position: Home > Articles > 16S rDNA Gene Clone and Detection of Pantoea stewartii subsp.stewartii by Real-Time Fluorescent PCR Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences) 2003,29 (3) 183-187

玉米细菌性枯萎病菌16S rDNA基因克隆及TaqMan探针实时荧光PCR

作者：

漆艳香;肖启明;朱水芳

单位：

国家质检总局动植物检疫实验所;湖南农业大学植物保护学院

关键词：

玉米细菌性枯萎病菌;16SrDNA;TaqMan探针

摘要：

为给农业和植物检疫部门提供一种特异性强、灵敏度高,可以快速、直接检测植物病原菌的方法,将玉米细菌性枯萎病菌16SrDNA基因克隆测序,根据该细菌与其他细菌菌株16SrDNA序列差异,设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定点突变的特异性探针,除泛菌属3个种和欧氏菌属3个种外,还对假单胞菌属1个种,黄单胞菌属1个种,棒形杆菌属1个种,短小杆菌属1个种以及5种植原体进行了实时荧光PCR检测.结果表明:只有玉米细菌性枯萎病菌产生荧光,其他细菌和植原体都没有荧光产生.检测的灵敏度为104CFU/mL的菌悬浮液,相当于4个细菌细胞的基因,灵敏度高,也就是说,反应体系中只要有2个活细菌,实时荧光PCR就能检测到.相对灵敏度为107CFU/mL,而且整个检测过程只需2h,由于实验采用独特全封闭反应管及光电传导系统,不用凝胶电泳,降低了污染.

译名：

16S rDNA Gene Clone and Detection of Pantoea stewartii subsp.stewartii by Real-Time Fluorescent PCR

作者：

QI Yanxiang1, XIAO Qiming1, ZHU Shuifang2 (1.College of Plant Protection, HNAU,Changsha410128,PRC; 2.Institute of Animal and Plant Quarantine, AQSIQ, Beijing100029,PRC)

关键词：

Pantoea stewartii subsp.stewartii;16S rDNA;TaqMan probe

摘要：

A groupspecific probe is designed based on its sequence, which is used to detect 3 species of Pantoea,3 species of Erwinia, 1 species of Pseudomonas, 1 species of Xanthomonas,1 species of Clavibacter,1 species of Curtobacterium and 5 species of Phytoplasma. The results show that no signal is detected for other bacteria and Phytoplasma except Pantoea stewarti subsp.stewartii and the relative sensitivity is 107 CFU/mL. The sensitivity of colony's suspension is 104 CFU/mL . That is to say, if reactionary system has 2 live bacteria, realtime fluorescent PCR can detect it.Contamination is brought down as the whole detection process is finished in the contained tubes.The method is more specific than normal PCR, and besides, it was studied and applied for the first time in the world.TaqMan probe designed in the study can detect Pantoea stewartii subsp.stewartii directly during the PCR amplification.

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