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Position: Home > Articles > Cloning and expression of vecombinent of protein Penton gene from egg drop syndrome virus and identification of expressed protein antigenicity Journal of Northeast Agricultural University 2009,40 (2) 89-93

减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定

作者：

肖妙;于志丹;马波;王君伟

单位：

东北农业大学动物医学学院

关键词：

减蛋综合征病毒;五邻体;原核表达;抗原性

摘要：

根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株的五邻体比较有9个碱基突变,但利用DNAstar分析,两者的氨基酸完全一致。然后酶切胶回收后将目的片段连接到质粒表达载体pET-30a(+),获得的阳性克隆命名为pET-30a-Penton。将pET-30a-Penton转化E.coli Rosetta,经37℃、1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达5 h,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,结果显示目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.0 ku。Western Blot试验结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。

译名：

Cloning and expression of vecombinent of protein Penton gene from egg drop syndrome virus and identification of expressed protein antigenicity

作者：

XIAO Miao,YU Zhidan,MA Bo,WANG Junwei(College of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

关键词：

egg drop syndrome virus;Penton;prokaryotic expression;antigenicity

摘要：

With a pair of primers designed according to the complete gene sequence of egg drop syndrome virus(EDSV) AV-127 strain in GenBank(AC000004),the complete Penton gene was amplified by PCR,and cloned into pMD18-T vector.The sequence analysis revealed that the target gene has 9 bases mutation from Penton gene of EDSV reported in GenBank.The recombined plasmid was transformed into E.coli Rosetta and induced by 1.0 mmol·L-1 of IPTG,37 ℃ for 5 h.The SDS-PAGE analysis showed that the expressed fusion protein with a molecular weight of 54.0 ku existed in the inclusion body.The Western Blot analysis showed that the protein had good antigenicity.

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